期刊简介

  本刊主要刊载皮肤病与性病学科的专业文章,促进我国医药卫生事业发展。读者对象:县及县以上医院皮肤科学专业医师,与皮肤科相关的学科人员。

       

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  • 杂志名称:临床皮肤科杂志
  • 主管单位:江苏省卫生厅
  • 主办单位:江苏省人民医院(南京医科大学第一附属医院)
  • 国际刊号:1000-4963
  • 国内刊号:32-1202/R
  • 出版周期:月刊
期刊荣誉:中国科技论文统计源期刊期刊收录:农业与生物科学研究中心文摘, 统计源核心期刊(中国科技论文核心期刊), 万方收录(中), 维普收录(中), 文摘与引文数据库, CSCD 中国科学引文数据库来源期刊(含扩展版), CA 化学文摘(美), 上海图书馆馆藏, 知网收录(中), JST 日本科学技术振兴机构数据库(日), 国家图书馆馆藏, 北大核心期刊(中国人文社会科学核心期刊), 医学文摘
临床皮肤科杂志2014年第05期

雷帕霉素对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬诱导效应及其分子机制的初步研究

陈旭;徐松;黄丹;鞠梅;陈崑;李新宇;顾恒

关键词:雷帕霉素, 角质形成细胞, 自噬
摘要:目的:初步探讨雷帕霉素在不同浓度和不同孵育时间下,对人角质形成细胞系HaCaT细胞自噬的诱导效应及其分子机制.方法:不同浓度雷帕霉素处理HaCaT细胞4h或12h后,利用四甲基偶氮唑盐(MTT)方法检测雷帕霉素对细胞活力的影响,并提取蛋白进行蛋白印迹实验,检测LC3-Ⅱ表达水平,作为自噬的检测方法;通过透射电镜分析自噬体形成,确认雷帕霉素对自噬的诱导效果.检测自噬调控上游关键元件哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)蛋白表达及其ser2481和ser2448磷酸化产物水平,分析mTOR活性;并分析自噬调控下游的另一关键基因Atg7的表达,初步分析雷帕霉素诱导HaCaT细胞的分子机制.结果:不同浓度雷帕霉素处理4h,对HaCaT细胞的活力没有显著的影响.高剂量雷帕霉素(80 nmol/L和100 nmol/L)在处理12h后对HaCaT细胞的活力产生毒性效应.20 nmol/L和50 nmol/L雷帕霉素孵育4h诱导HaCaT细胞LC3-Ⅱ表达上调,而20 nmol/L和50 nmol/L雷帕霉素孵育12h仍具有诱导效应.相较于其他浓度,在50 nmol/L雷帕霉素孵育诱导的LC3-Ⅱ表达上调效应为显著,并且在药物孵育4h时超微结构水平诱导产生胞质内大量自噬体形成.1~50 nmol/L浓度的雷帕霉素孵育4h或12h均可诱导HaCaT细胞mTOR ser2481和mTOR ser44s磷酸化产物水平降低;然而Atg7表达不能观测到显著的差异.结论:50 nmol/L雷帕霉素孵育4h具有显著的诱导HaCaT细胞自噬效应.HaCaT细胞mTOR分子对雷帕霉素处理敏感,可被其诱导产生蛋白活化抑制效应.这种mTOR信号抑制可能参与了雷帕霉素对HaCaT细胞的自噬诱导效应,但Atg7没有参与这种调控效应.